Степень изолирования сиднокарба при использовании частной методики составила 44,36%2,51% (SХср =1,0412; =2,51%).
Для исследования крови дополнительно провели разрушение комплексов белок - определяемое вещество с последующей очисткой гексаном. В качестве методов разрушения указанных комплексов применили добавление амфифильного растворителя (ацетонитрила), денатурирующего агента (кислоты трихлоруксусной) и кислотный гидролиз.
Установлено, что оптимальным методом разрушения комплексов исследуемые вещества - белки плазмы крови является добавление амфифильного растворителя - ацетонитрила (табл. 2). Применение денатурирующих агентов и гидролиз приводит к полной потере изолируемого вещества (более 85%).
Максимальный выход исследуемых производных фенилалкиламина из тканей внутренних органов обеспечивается применением оптимальных экстрагентов, кратности экстракции и рН среды экстрагирования, которые установили по методике Карташова В.А.
В качестве экстрагентов исследовали органические растворители различной природы (гидрофильные, липофильные и гидрофобные): раствор кислоты щавелевой 0,1%, раствор кислоты хлороводородной 0,1 н.; гексан, хлороформ, эфир диэтиловый; спирт этиловый 96%, ацетон, ацетонитрил и смесь ацетон-спирт этиловый 96% (1:1).
Установлено, что максимальная степень изолирования
мидокалма из биологического материала достигается при использовании трехкратной экстракции ацетонитрилом - 87%, ацетоном - 52%;
кетамина - 58% и 56%;
флуоксетина - 42% и 39%;
сиднокарба - 29% и 18%.
Далее выбрали оптимальные значения рН среды. Для создания необходимых рН применили растворы кислоты хлороводородной (рН=2,0) и аммония гидроксида (рН=10,0). На первой ступени экстракции использовали ацетонитрил, а на последующих – ацетонитрил, к которому в равном количестве добавляли воду очищенную (рН=7,0), раствор кислоты хлороводородной 0,1 н. (рН=2,0), раствор аммония гидроксида 5% (рН=10,0).
Установлено, что максимальный выход исследуемых веществ наблюдается при использовании экстрагента с рН=7,0:
мидокалм - 71%,
кетамин - 50%,
флуоксетин - 41%,
сиднокарб - 25%.
На основании установленных оптимальных значений факторов экстрагирования разработали методику изолирования кетамина, мидокалма, флуоксетина и сиднокарба из тканей внутренних органов (рис. 2).
Внутренние органы (печень)
Экстракция ацетонитрилом (рН=7,0)
Двухкратная экстракция смесью ацетонитрил- вода очищенная (1:1) (рН=7,0)
Очистка от липидов (экстракция гексаном)
+ НCI, 10% (рН=2,0)
Экстракция эфиром диэтиловым
Водная фаза
Кислое извлечение
рН= 8,0, глициновый буфер (сиднокарб)
рН=8,5, натрия карбонат (флуоксетин)
Экстракция углеродом четыреххлористым
Щелочное извлечение
рН=10,0 (NH4OH, 25%), NаCI
Последовательная экстракция хлороформом и
эфиром диэтиловым
глициновый буфер (сиднокарб)
Рис.2. Схема изолирования исследуемых веществ из тканей внутренних органов
Общий выход кетамина, мидокалма, флуоксетина и сиднокарба из тканей внутренних органов определили с использованием «модельных смесей»: навеска печени трупа с добавлением определенных количеств веществ (табл. 3).
В качестве сравнения использовали общепринятые методики изолирования Васильевой А.А., Карташова В.А.
Установлено, что разработанная методика изолирования из тканей внутренних органов обеспечивает более высокий выход
мидокалма (85%),
кетамина (60%),
флуоксетина (35%),
сиднокарба (38%), чем по методу Васильевой А.А.: мидокалм - 29%, кетамин - 12%, сиднокарб - 12%, флуоксетин- менее 5%; по методу Карташова В.А.: мидокалм - 41%, кетамин - 26%, флуоксетин - 21%, сиднокарб - 37%.
Таблица 3
Результаты определения степеней изолирования исследуемых веществ из тканей внутренних органов (без проведения очистки)
-
Препарат
Степень изолирования, % (n=5; P=95%; tp=2,78)
Кислое извлечение
Щелочное извлечение
Хср Х
SХср
Е, %
Хср Х
SХср
Е, %
Мидокалм
15,901,69
0,7563
4,76
69,443,42
1,5293
2,20
Кетамин
Менее 5%
-
-
59,203,12
1,3955
2,36
Флуоксетин
10,562,31
1,0312
6,77
24,962,90
1,2968
5,02
Сиднокарб
18,062,10
0,9405
5,21
22,632,25
1,0065
3,45
