Доказаны высокая специфичность, прецензионность и линейность разработанных методик химико-токсикологического анализа кетамина, мидокалма, флуоксетина и сиднокарба.
Разработка схемы исследования случаев комбинированных отравлений.
При применении разработанной методики для исследований практических экспертных случаев отмечены отравления кетамином, мидокалмом, флуоксетином и сиднокарбом в сочетании с другими широко распространенными лекарственными препаратами: димедрол (метаболит - бензгидрол), прометазин (метаболит - сульфоксид прометазина), тиопентал - натрия, амитриптилин.
На «модельных смесях» определен выход димедрола, дипразина, тиопентала, амитриптилина и их метаболитов при использовании разработанной методики
Использование разработанной методики химико-токсикологического анализа позволяет достигать достаточно высокий выход из тканей внутренних органов: тиопентала – натрия 65%, дипразина 70%, сульфоксида 60%, димедрола 50%, бензгидрола 30%, амитриптилина 80%.
Схема исследования комбинированных отравлений представлена на рис. 3. Использовали ТСХ-скриниг и ВЭЖХ с базой данных «БД-2003-350».
ТСХ-скрининг проводили по модифицированной методике Карташова В.А. на пластинках «Sorbfil» (метчики: хинин, аминазин, амидопирин, дибазол). После определения хроматографической группы (подгруппы) идентифицируемых препаратов проводили подтверждающие качественные реакции.
Дальнейшую идентификацию и количественный анализ целесообразно проводить методом ВЭЖХ с использованием базы данных «БД-2003-350».
Биологический материал
Изолирование
ТСХ-скрининг
ВЭЖХ
Анализ хроматограммы
-Исключение пиков «холостого градиента»;
-Исключение фоновых пиков биологического материала;
-Исключение пиков мало токсичных веществ;
-Идентификация остальных пиков.
Положительный результат:
-Определение хроматографических групп и подгрупп;
-Предварительная идентификация производных фенотиазина, пиразолона, барбитуровой кислоты;
-Предварительная иденти-фикация кетамина, сиднокарба, флуоксетина и мидокалма.
Отрицательный результат
Количественное определение
.
Рис. 3 Схема исследования случаев комбинированных отравлений исследуемых производных фенилалкиламина в сочетании с некоторыми лекарственными средствами.
Исследование сохраняемости кетамина, мидокалма, флуоксетина и сиднокарба в биологическом материале. Важное значение для проведения химико-токсикологического анализа имеет сохраняемость лекарственных веществ в биологическом материале.
Для изучения сохраняемости мидокалма, кетамина, флуоксетина и сиднокарба определили степень разложения в тканях печени при хранении образцов в различных условиях. Определено влияние на разложение исследуемых препаратов пониженной температуры (от –2,0 до +2,0С) и добавление спирта этилового 96% в соотношении 1:1.
Исследование проводили по общепринятой методике с применением «модельных смесей» (Крамаренко В.Ф., 1989 г.).
У
становлено, что оптимальные условия хранения биологических образцов, содержащих кетамин, флуоксетин и сиднокарб: температура холодильной камеры от –2,0 до +2,0С, мидокалм - дополнительная фиксация спиртом этиловым 96% (рис. 4).
Рис. 4 Результаты определения степени разложения исследуемых веществ при использовании оптимальных условий хранения
Предельные сроки хранения образцов составляют: в случае содержания кетамина и мидокалма – 90 суток (степень разложения соответственно 33% и 48%), флуоксетина - 30 суток (степень разложения 20%). Полное разложение исследуемых веществ в биологических объектах наблюдается при хранении 180 дней.
Сиднокарб в биологическом материале подвергается разрушению при хранении образцов 30 суток (степень разложения 78%), поэтому для повышения результативности химико-токсикологического исследования секционный материал необходимо направлять сразу после забора.
Общие выводы:
Определены оптимальные значения факторов экстрагирования исследуемых веществ: мидокалм и кетамин - рН= 9,0-10,0, экстрагент - хлороформ; флуоксетин - рН=6,0-8,0, экстрагент - углерод четыреххлористый; сиднокарб - два максимума на кривой экстракции, обусловленные наличием двух таутомерных форм сиднониминового цикла: рН=3,0-4,0, экстрагент - эфир диэтиловый и рН=8,0-10,0, экстрагенты углерод четыреххлористый и эфир диэтиловый.
Разработаны методики изолирования мидокалма, кетамина, флуоксетина и сиднокарба из биологических жидкостей и тканей внутренних органов, обеспечивающие суммарный выход кетамина – кровь - 72%, моча - 95%, органы - 59%; мидокалма: кровь - 80%, моча - 94%, органы - 86%; флуоксетина: кровь - 38%, моча - 55%, органы - 43%; сиднокарба: кровь - 20%, моча - 44%, органы - 41%).
Подобраны оптимальные условия очистки методом ТСХ: на пластинах «Sorbfil», элюент - спирт этиловый 96%, обеспечивающие минимальные потери: кетамина - 22%, флуоксетина - 30%, сиднокарба - 27%, мидокалма - 20%.
Изучены спектральные характеристики сиднокарба, кетамина, мидокалма, флуоксетина в УФ-области. Выявлена возможность использования дифференциального спектра для идентификации сиднокарба (при изменении рН происходит смещение максимумов оптической плотности в интервале 235-253 нм и 294-335 нм); сольватохромных эффектов для флуоксетина (гиперхромный эффект) и мидокалма (батохромный и гипохромный эффекты).
Разработаны методики идентификации исследуемых производных фенилалкилминов методом ТСХ при использовании в качестве подвижных фаз: спирт н-бутиловый, хлороформ - ацетон (7:3) и спирт н-бутиловый – эфир диэтиловый (8:2) и проявителей: реактивов Драгендорфа, Бушарда, раствора нингидрина в спирте н-бутиловом 1%, раствора калия йодплатината 5%, раствора натрия нитропруссида 5%.
Определены оптимальные условия разделения кетамина и мидокалма методом ГЖХ, позволяющие проводить их идентификацию и количественное определение в биологических объектах: программирование температуры, капиллярная колонка с привитой НЖФ SE-30. Пределы обнаружения 100 мкг в 100 мл биологической жидкости и 150 мкг в 100 г внутренних органов.
Подобраны оптимальные условия для проведения идентификации и количественного определения кетамина, мидокалма, флуоксетина и сиднокарба в извлечениях из биологических объектов методом ВЭЖХ: градиентный режим, обращенно - фазная колонка. Пределы обнаружения: мидокалм и кетамин 30 мкг в 100 мл биологической жидкости и 50 мкг в 100 г внутренних органов; флуоксетин и сиднокарб- 50 и 100 мкг соответственно.
Разработана схема анализа трупного материала в случаях комбинированных отравлений мидокалмом, кетамином, флуоксетином и сиднокарбом с амитриптилином, дифенилгидрамином (димедролом), прометазином (дипразином) и тиопенталом- натрия, включающий в себя изолирование, ТСХ и ВЭЖХ скрининг. Установлены значения выходов веществ из тканей печени при использовании разработанной методики.
Изучена сохраняемость кетамина, мидокалма, флуоксетина и сиднокарба в трупном материале. Установлены оптимальные условия хранения экспертного материала: температура холодильной камеры от –2,0 до +2,0С и фиксация спиртом этиловым 96%.
Выявлены максимальные сроки хранения образцов биологического материала: для определения кетамина и мидокалма - 90 суток, флуоксетина - 30 суток. Исследование сиднокарба необходимо проводить непосредственно после забора образцов.
В заключение благодарим заведующую химическим отделением Алтайского краевого бюро судебно-медицинской экспертизы Воронкову Л.Г. и ведущего эксперта Царева В.И. за помощь и сотрудничество при проведении экспериментальных исследований.
По теме диссертации опубликованы следующие работы:
Исследование сиднокарба в химико-токсикологическом отношении // Актуальные вопросы судебной и клинической медицины- Барнаул, 2003.-С.34-35 (соавт. Воронкова Л.Г.)
Разработка оптимальной методики химико-токсикологического анализа сиднокарба // Молодежь – Барнаулу 2003. Материалы научно-практической конференции. –Барнаул, 2003.- С 47 (соавт. Федосеева Л.М.)
О возможности применения классических методик изолирования в химико-токсикологическом анализе сиднокарба // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сборник научных трудов. – Пятигорск, 2004. – Вып. 59. – С.170-172 (соавт. Федосеева Л.М.)
Поиск оптимальных условий изолирования сиднокарба // Молодежь – Барнаулу 2004. Материалы научно-практической конференции. –Барнаул, 2004.- С. 195-196 (соавт. Федосеева Л.М.)
Модификация метода ТСХ-скрининга ядовитых и сильнодействующих азотсодержащих органических оснований // VI конгресс молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» – Томск, 2005. – С. 94 (соавт. Федосеева Л.М.)
Разработка комплексного химико-токсикологического анализа мидокалма // Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики- Барнаул, 2005.- С.34-38
Изучение спектральных характеристик препаратов-производных фенилалкиламина (сиднокарба, кетамина, мидокалма) // Молодежь – Барнаулу 2005. Материалы научно-практической конференции. –Барнаул, 2005.- С 23. (соавт. Федосеева Л.М.)
Анализ препаратов группы фенилалкиламинов методом тонкослойной хроматографии // «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сборник научных трудов». – Пятигорск, 2005. – Вып. 60. – С.226-228 (соавт. Федосеева Л.М.)
Разработка методики идентификации некоторых препаратов- производных фенилалкиламина в условиях химико-токсикологического анализа // Приоритеты фармацевтической науки и практики: Материалы заочной международной конференции- Москва, 2006.- С-261-263 (соавт. Федосеева Л.М.)
Выбор оптимально экстрагента мидокалма из биологического материала // Материалы национальной научно-практической конференции с международным участием: «Состояние, перспективы судебно-токсикологической службы и научных исследований» –Харков, 2006.- С 48 (соавт. Федосеева Л.М.)
Опыт использования базы данных «БД-2003-250» на жидкостных хроматографах «Милихром-А02» при судебно-химических исследованиях // Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики- Новосибирск-Красноярск, 2007.- С 46-51 (соавт. Заздравных Н.А.)
Химико-токсикологический анализ кетамина // Фармация. – 2007. - № 8. – С. 6-9. (соавт. Федосеева Л.М.)*
Анализ использования метода ВЭЖХ на хроматографах «Милихром А-02» в химико-токсикологическом анализе.// Аналитические методы и приборы для химического анализа- Санкт-Петербург, 2007.- С 17-23 (соавт. Воронкова Л.Г.)
Химико-токсикологический анализ препарата флуоксетин // Судебно-медицинская экспертиза. – 2008. - № 4. – С. 31-35 (соавт. Воронкова Л.Г.)*
Разработка методики изолирования кетамина, мидокалма, флуоксетина и сиднокарба // Актуальные вопросы судебно-химических, химико-токсикологических исследований и фармацевтического анализа –Пермь, 2009.-С. 57-59 (соавт. Федосеева Л.М.)
Казарцев Илья Александрович (Россия)Химико-токсикологический анализ некоторых производных фенилалкиламина (мидокалма, кетамина, флуоксетина и сиднокарба).В результате проведенных исследований определены условия изолирования кетамина, сиднокарба. флуоксетина и мидокалма из биологических жидкостей и тканей внутренних органов. Установлены оптимальные условия разделения, способы детектирования и количественного определения кетамина, мидокалма, флуоксетина и сиднокарба в извлечениях из биологического материала различными физико-химическими методами анализа. Проведена валидация разработанной методики, определены показатели: пределы обнаружения и количественного определения в 100 г биологического объекта, сходимость результатов (прецензионность), правильность, линейность. Показана возможность использования разработанной методики химико-токсикологического анализа для решения различных научных и практических задач, в частности для изучения сохраняемости мидокалма. флуоксетина, сиднокарба и кетамина при гнилостном разложении трупного материала.
Kazarcev Ilia (Россия).Analytical toxicology of some derivatives phenylalkylamines (mydocalm, ketamine, fluoxetine and sydnocarb).In the result of the research defined the conditions of isolation mydocalm, ketamine, fluoxetine and sydnocarb of biological fluids and tissues of internal organs. Optimum conditions of separation, methods of quantative and quantitative determination of mydocalm, ketamine, fluoxetine and sydnocarb in extracts from biological material of different physical-chemical methods of analysis. Carried out the validation of the developed method, defined indicators: the limits of detection and quantification in 100 g of a biological object, the convergence of the results, the accuracy, linearity. The possibility of use of the developed methods of analytical toxicology for the solution of various scientific and practical tasks, in particular for the study of the preservation of mydocalm, ketamine, fluoxetine and sydnocarb at putrid the decomposition of the corpse of the material.
